00-24 Diennakts veterinārā klīnika KAVET

Иммунотерапия у собак при онкологических заболеваниях.

Опубликовано: Материалы третьего Международного симпозиума: «Современные проблемы ветеринарной диетологии и нутрициологии», С. – П., 2005, с. 271-277.      

 Иммунотерапия у собак при онкологических заболеваниях.

С. Семёнов ( ООО „ КАВЕТ ”, Рига, Латвия ); Е. Быкова ( ООО «Рижский Центр Репродукции», Латвия ), Н. В. Мухина ( СПбГАВМ, РФ ); А. Кейша ( ООО „ КАВЕТ ”, Рига, Латвия );  Л. Иванова ( Рижский Университет Страдыня, Латвия ).

Актуальность

Результатами научно — практических ис­следований последних 10 лет в области ветеринарии доказано, что в настоящее время у домашних животных на фоне наблюда­ется рост патологии, обусловленной на­личием и прогрессивным развитием вто­ричного иммунодефицита ( ИДС ) [13,15, 23,27]. Особенно ИДС проявляется при онкологических заболеваниях, бакте­риально-вирусных инфекцииях, при различной патологии  репродуктивной функции животных [ 2,4,12,26]. Причем злока­чественные новообразования среди от­дельных пород животных в структуре общей заболеваемости и смертности за­нимают первое место в мир Так, по ре­зультатам исследований, проведенных среди 222000 собак шведскими ветери­нарными врачами во главе с доктором Bonett,  показатель онкологических заболе­ваний колеблется в пределах ( в зависи­мости от породы) от 12 до 45%  и в на­стоящее время наблюдается тенденция к росту данной патологии [ 6 ]. При этом и бактериально-вирусные инфекции и дру­гая патология, ассоциированная с инфек­цией различной локализации, составляет более 80%. В эту группу включены животные с онкопатологией, осложненной присоединившейся на фоне имеющегося ИДС, инфекции [ 7,8 ]. За последние три года,  по статистике одной из крупных и многопрофильных ветери -натных клиник Латвии «KAVET» (Рига), у собак отмечается рост злокачественных и доброкачественных опухолей молоч- ных желез, печени,  поджелудочной же-лезы, костей и суставов. Наиболее частой онкопатологией являются доброкачест­венные и злокачественные опухолевые образования кожи.

В связи с низким болевым порогом  у животных их владельцы не замечают начало заболевания и в ветеринарную  клинику обращаются уже с очень запущенными процессами злокачественных новообразований. При этом животное начинает ощущать диско­форт или боли, изменяется его поведение и внешний вид, снижается аппетит. И поскольку методы лечения данной патологии в ветеринарной практике не разработаны, животное, как правило, усыпляется.

На развитие онкопатологии и сопутствующего ей вторичного ИДС у животных влияют как социальные, так и медико-биологические факторы, в ре­зультате изменяются механизмы кон­троля со стороны иммунной системы над процессами клеточной пролиферации и дифференцировки клеток из-за активного подавления ее функций. При этом малиг­низированная клетка не распознается иммунокомпетенными клетками боль­ного организма. Общее их свойство – способность к бесконтрольному размно­жению, инвазии и метастазированию. В виду того, что процессы метаболизма у животных протекают ускоренно, то как количественные так и качественные не­опластические процессы нередко  разви­ваются  очень быстро. Применяемая в современном комплексном лечении тера­пия, как правило индуцирует иммуносу­прессию по клеточному типу. Это опас­ный путь лечения, поскольку опухоле­вые клетки сами по себе тоже подавляют ответ организма на их наличие, при этом значительно сни­жаются функции специфических и не­специфических факторов иммунной за­щиты организма. Как результат — разви­вается состояние вторичного иммуноде­фицита (ИДС), значительно возрастает риск раз­вития вторичных бактериально-вирусные инфекций и реактивация имеющихся оча­гов воспаления. В связи с этим обосно­ванно включение в программу лечения онкопатологии иммунотропных препара­тов, которые способны изменять взаимо­отношения между опухолью и организ­мом. При этом создание новых противо­опухолевых препаратов, обладающих противоопухолевым действием, является важнейшей медико-биологической про­блемой, которая, несмотря на ее актуаль­ность в ветеринарии, стала мнгостроронне решаться сравнительно недавно  [5,11,14,18,19 ].

Информация о новом иммуномодуля­торе Римолан.

В 1998 году сотрудниками Рижского Центра Репродукции (ООО) совместно с сотрудниками кафедры технологии ле­карственных средств Рижского Универ­ситета Страдыня разработана технология и фармацевтическая статья нового им­муномодулятора Римолан. Сырьем при производстве данного препарата является клетки трофобласта плаценты. Идея использования плаценты при онкопатологии принадлежит известному Российскому иммунологу проф. В. И. Говалло. Результаты своих исследований и клинических наблюдений В. И. Говалло опубликовал в монографии “Immunology of Pregnance and Cancer”      ( Nova Science Publishers, Ins.USA, 1993, 310p.p). В настоящее время на производ­ство препарата нами получена Лицензия (GMP) (Nr.VZA-4-02) и Регистрационное Удостоверение для его применения в ве­теринарной практике (Nr./No/ VFP-01519-02). Римолан – это природный, биологи­чески активный препарат. Он содержит цитокиновые комплексы, репродуктив­ные гормоны, которые также являются муномодуляторами, АФП и другие бел­ковые компоненты. Изучение состава Римолана показало, что он содержит ци­токины: TNF-ά, IL-2, L-8, IFN-ά, IL-1 и другие. В высокой концентрации — фер­ритин.

Благодаря наличию цитокинов иммуно­терапия стала адекватной, клинически эффективной. Особенно важна при этом роль IL-2, т.к. он является ключевым зве­ном в развитии иммунного ответа. Уста­новленно, что он целенаправленно влияет на рост, активацию T- и B- лимфоцитов и других иммунокомпетентных  популяций клеток ( моноцитов, макрофагов и др.) [9,22,24]. Сравнения аминокислотных по­следовательностей IL-2 у человека и та­ковых у собак и кошек выявило высокий процент гомологии. Для собак это со­ставляет 84%, для кошек-80% [17,19]. Известно, что все эти факторы иммунной системы обладают противоопухолевой и  антибактериально — вирусной защитой организма.

Римолан содержит также IFN-ά, который способствует активизации макрофагов и NK-клеток и таким образом обеспечивает IL-1, IL-2, IL-4, IL-6 и TNF-ά. В резуль­тате макрофаги и NK-клетоки становятся способными разрушать необластные и вирусом инфицированные клетки, что доказано и результатами наших доклини­ческих исследований [3,25]. Из-за при­сутствия в препарате высокой концен­трации ферритина, предполагается, что Римолан обладает и антиоксидативным действием.

Практически эта сложная многофункцио­нальная иммунорегуляция может быть достигнута только при помощи много­компонентной субстанции, которая близка к натуральной. Римолан является субстанцией такого рода.

Доклиническая апробация препарата была проведена в соответствии с Протоколами : « Изучение потенциальных мутагенных свойств препарата «RIMOLAN» в УНГЦ МЗ Украины, Киев,1998 г.; «Изучение безвредности препарата Римолан на собаках» в УНГЦ МЗ Ук­раины, Киев, 1998 г.; «Испытания им­мунотропной активности Римолана» в Институте Иммунологии РФ, Москва, 1998 г; «Экспе­рементальная оценка острой цитотоксич­ности,  профилактической и противоопу­холевой эффективности препарата Римо­лан» в МНИОИ им. Герцена, Москва, 1999 г.; «Исследование противоопухоле­вой активности препарата Римолан на модели перевивных опухолевых штамов мышей» в  МНИОИ им. Герцена, Москва, 2000 г.;«Влияние препарата Римолан на уровень некоторых цитокинов (ИЛ-1β, ФНО-ά, ИНФ-γ, ИЛ-6, ГМ-КСФ) в сыво­ротке крови мышей – опухоленосителей на модели меланомы В-16» в МНИОИ им. Герцена, Москва,  2000 г..

Результатами данных экспериментальных исследований было доказано, что Римо­лан: проявляет широкий спектр иммуно­тропной активности; стимулирует про­межуточно-клеточную и гуморальную ответную реакции при первичном нор­мальном состоянии  или при состоянии

в­торичного иммунодеффицита;повышает активность Т-лимфоцитов в реакциях клеточного иммунитета гиперчувстви­тельности и трансплаптанта хозяина; стимулирует и регулирует фагоцитарную активность нейтрофилов при первичных нормальных показателях или при вто­ричном   иммунодеффиците; не влияет на гематологическую активность компли­мента и миграцию стволовых клеток; имеет достоверный эффект торможения роста опухоли как при лечении, так и при профилактики ( эксперимент был прове­ден на аденокарциноме легких Люиса (LLC) и на твердом варианте лимфолей­коза – Р-388); имеет достоверный эффект продления жизни (эксперимент был про­веден на тех же опухолях); не обладает высокой цитотоксичностью ( объектом исследования in vitro были привиты кле­точные линии человека: аденокарцинома молочной железы – MCF-7, карцияични­ков — SKOV-3, эпидермальная карцинома гортани – Нер-2; не обладает мутагенной активностью; не индуцирует генную му­тацию максимальных механизмов дейст­вия и не является эмбриотоксичным.

Средняя летальная доза (LD50) при введении подкожно белым мышам  составляет более чем 2000 мг/кг. Практи­ческая летальная доза (LD50) препарата в данном эксперименте не была найдена. В экспериментах с белыми мышами и соба­ками при терапевтической рекомендуе­мой дозе препарат не вызывает измене­ний в организме животных, что доказано  при клинико-лабораторном обследовании животных.

Материал, методы и результаты клинического применения препарата Римолан у собак при онко­патологии.

            Лечение Римоланом проведено у 28 собак (основная группа) с онкологическими заболеваниями различной локали­зации (таблица 1). Для сравнения мето­дов терапии и их клинической эффектив­ности обследовали 12 животных (кон­трольная группа), принимающих обще­принятую при данной патологии в вете­ринарной практике терапию. Возрастные группы животных представлены в таб­лице 2.

            Злокачественное течение заболева­ния у животных обеих групп подтверждено гистологически. Мета­стазы в основной группы были выявлены при раке прямой кишки, предстательной железы. Операция была проведена у 20 собак. Среди животных контрольной группы были прооперированны все, при­чем 3 собаки – повторно.

Доза препарата и схема его введе­ния отработана с учетом основного диаг­ноза, веса животного и показателей его иммунограммы. Курс иммунотерапии: 1 инъекция в неделю, продолжительность курса 5-7 недель. При введении препа­рата ни у одного из животных не было токсических и аллергических реакций.

Из параклинических исследований собакам обеих групп проводили: клини­ческий и биохимический анализы крови. Из показателей функции иммунной сис­темы взяты показатели ее неспецифиче­ской резистентпости ( фагоцитоз и фаго­цитарный индекс).

Таблица 1. Распределение животных по диагнозам

Диагноз

Основная группа n=28

Контрольная группа n=12

Абсолютное число

%

Абсолютное число

%

Ca gl. Mammae

13

46,4

6

50

Osteosarcoma

3

10,7

1

8,3

Hondroma

 

 

1

8,3

Ca Pulmonum

1

3,6

 

Ca Prostatae

1

3,6

1

8,3

Ca Rectum

1

3,6

 

Lymphoma

2

7,1

 

Ca Prepucia

3

10,7

 

Melanoma

 

1

8,3

Hemangioma

 

2

16,6

Сa ovarii

2

7,1

 

Adenocarcinoma

2

7,1

  

Таблица 2 . Распределение животных по возрастным группам

Группы

6 лет

7 лет

8 лет

10 лет

11 лет

12 лет

13 лет

14 лет

Основная группа n=28

3

1

2

5

6

1

4

6

Контрольная группа n=12

4

2

2

2

2

%

17,5

7,5

10,0

17,5

20,0

2,5

10,0

15,0

Сравнение всех исходных (до терапии) параклинических показателей проводили с данными, полученными у 12 здоровых собак, имеющих значение физиологиче­ских норм. Данные представлены в таблице 3. Обследование общепринятых клинических и биохимических показате­лей крови проводилось перед каждой по­следующей инъекцией Римолана и через неделю после последней.

Таблица 3.  Основные показатели клинического анализа крови у здоровых собак и при онкопатологии

Visit

Er.
10×1/L

Hb
g/dl

L
10×9/L

ly%
%

ly abs
10×9/L

m±

Mo %

m±

Mo abs.

m±

Группа больных собак n=40

5.48

13.26

18.33

7.80

1.11

0.056

2.80

0.092

0.46

0.019

Группа здоровых собаки n=12

6.23

15.06

12.05

15.55

2.34

0.226

3.64

0.169

0.42

0.016

Как следует из таблицы 3, показатели ге­моглобина, эритроцитов, а также лейко­цитов и абсолютного числа лимфоцитов, (выбор обусловлен значимостью данных показателей при онкопатологии), у боль­ных собак достоверно ниже в сравнении с таковыми при физиологической  норме (р<0,05). В остальных показателях  кли­нического анализа крови статистически достоверных различий мы не выявили. Обращает на себя внимание увеличение показателей фагоцитоза и фагоцитарный индекс после иммунотерапии Римо­ланом. Различия статистически досто­верны (р<0,05). А именно: до лечения эти показатели составляли в среднем 23±1,54% и 1,97±0,32% (р<0,05); после лечения 35,93±1,67% и 3,07±0,38%. У здоровых собак эти показатели были 53,62±3,2% и 3,84±0,54% соответственно. После курса лечения препаратом

Римолан у животных отмечено повышение их актив­ности, улучшение аппетита и сна, значи­тельное снижение болезненности,  собаки прибавляли в весе, заживлялись хрониче­ские раны кожи, кожа становилась эла­стичной, шерсть – блестящей. В свою очередь, у животных принимающих об­щепринятую при данной патологии тера­пию, отмечено незначительное повыше­ние их активности, посредственный ап­петит, частая тошнота и рвота, отсутст­вие сна, болезненность, требующая при­менения аналгетиков. Собаки медленно прибавляли в весе, шерстный покров их ос­тавался редким, тусклым.

Клинический исход иммунотера­пии в обеих группах животных представ­лен в таблице 4.

Таблица 4.Сравнительный клинический результат исхода терапии в группах животных с онкопатологией(принимавших Римолан и в группе -с общепринятой  терапией)

Группы животных живых

Ca gl. 

Mammae

Osteo-sarcoma

Hon-droma

Ca

Pulmonum

Ca

Prostatae

Ca

Rectum

Lym-phoma

Ca

Prepucia

Mela-noma

Heman-

gioma

Adeno-carci-noma

Основная группа n=21

12

1

1

1

2

2

2

Контрольная группа n=0

Однако, из 28 животных, 3 животных основной группы, при значительном улучшении их общего состояния и пара­клинических показателей, хозяева ре­шили усыпить. Четыре собаки умерли в результате прогрессирования процесса. 21 животное живо, чувствует себя удов­летворительно. Средняя продолжитель- ность жизни после лечения составляет от 1,5 до 2,5-х лет ( на 1 ноября 2004 года). В контрольной группе все животные умерли в течении 10 месяцев после курса терапии. В качестве иллюстрации в таб­лице 5 показана динамика изменений по­казателей клинического анализа крови у животных при проведении им курса Ри­молана.

Таблица 5. Основные показатели клинического анализа крови в динамике у собак с онкопатологией при  лечении Римоланом

Visit

Er.
10×12/L

Hb
g/dl
L
10×9/L
ly%
%

Ly

abs.

m±

Mo %

m±

Mo abs.

m±

1

5.48

13.26 18.33 7.80

1.11

0.056

2.80

0.092

0.46

0.019

2

5.65

13.14 16.56 15.40

1.95

0.060

5.80

0.239

0.83

0.039

3

5.90

13.49 14.86 19.60

2.18

0.070

6.10

0.281

0.74

0.034

4

6.55

14.17 11.89 22.70

2.24

0.054

7.40

0.276

0.82

0.036

5

6.67

14.20 10.17 24.30

2.39

0.083

7.20

0.175

0.71

0.020

Изменения в показателях лейкоцитов, процентного и абсолютного содержания лимфоцитов статистически достоверны (р<0,05). Найденные изменения в показателях числа эритроцитов, уровня гемоглобина свидетельствуют о стимуляции Римоланом кроветворения. Снижение до физиологической нормы числа лейкоцитов и повышение уровня абсолютного числа лимфоцитов, динамика показателей неспецифической функции иммунитета (фагоцитоз, фагоцитарный индекс) выявили антибактериальные свойства Римолана. Полученные данные следует расценивать как иммуномодулирующего действия препарата, которое было нами раннее выявлено в эксперименте на мышах данные [1,16].

ВЫВОДЫ:

  1. Римолан — препарат клинически эффективный у животных с онко­патологией различной локализа­ции.
  2. Римолан обладает иммунотропной активностью. Среди животных со злокачественными опухоли после курса его введения наблюдается продолжительная динамика пока­зателей иммунограммы (увеличе­ние до физиологических уровней абсолютного числа лимфоцитов, показателей фагоцитарной актив­ности нейтрофилов, циркулирую­щих иммунных комплексов и им­муноглобулинов).
  3. Римолан улучшает качество жизни больного и продлевает его жизнь за счет снижения болезненности состояния.
  4. Препарат следует рекомендовать в комплексном лечении   животных со злокачественными опухолями с целью коррекции нарушений функций иммунной системы и для профилактики при данной патоло­гии бактериально-вирусной ин­фекции.
  5. Полученные данные свидетельст­вуют о необходимости комплекс­ного подхода к терапии онкопато­логии с включением препаратов, обладающих иммуномодулирую­щим лействием.

Литература

  1. Быкова Е. Я., Арцимович Н. Г., Фадеева Т. А.  и др. Изучение иммунотропной активности нового плацентарного препарата Римолана в эксперименте // Журнал «Иммунология». г. Москва, 1999, №5, Стр. 23-26.
  2. Делизль Ф., Фумонтез Ш. Лимфома кошки // Ветеринар, 5-6/1999, с. 22-25.
  3. Демидов Л.В., Харкевич Г. Ю., Тимофеев И. В. //Практическая онкология.- 2003- т.4, №3, с. 140-147/ Успехи и неудачи применения цитокинов в лекарственной терапии некоторых солидных опухолей.
  4. Дубровина Е.//Патология воспроизволства. VETPORT ru,3c.
  5. Егорова В. Н., Сахарова Е.Д. Возможность использования мед цинского препарата Ронколейкин при иммунозаместительной терапии в ветеринарной практике. Ветеринарная практика №1(8), 2000, стр. 19-21
  6. Жан-Роль Самей. Смертность собак в зависимости от породы // Ж .«Ветеринар». 10-12/1999,с.41-42.
  1. Жернати И., Лилбер Ж. Иммунологические воспаления. Чась 1. Действующие факторы и механизмы //  Ветеринар, 4/2002, с. 20-29.
  2. Жернати И., Лилбер Ж. Иммунологические воспаления. Чась 2. Клинические аспекты нарушения //  Ветеринар, 5/2002, с. 24-31.
  3. Кидакидзе З.Г.// Цитокины. Практи ческая онкология.-2003.-т.4, №3, с. 131-137 .
  4. Карпенко Л.Ю. Некоторые аспекты иммунитета собак. www.vetart.ru/?page=publication&item=009&part=imglob
  5. Козлов В.К., Лебедев М.Ф., Егорова В.Н. Новые возможности иммунотерапии с использованием Ронколейкина®  рекомбинированного
  6. ИЛ-2 человека.// Terra Medica. 2001.№ 2. c.12-14.
00-24 Diennakts veterinārā klīnika KAVET